Northern blot

en northernblot är en laboratoriemetod som används för att detektera specifika RNA-molekyler bland blandning av RNA. Northern blotting kan användas för att analysera ett prov av RNA från apartikulär vävnad eller celltyp för att mäta RNA-uttrycket av speciella gener. Denna metod namngavs för sin likhet med teknikenkänd som en sydlig fläck.

det första steget i en nordlig fläck är att denaturera eller separera RNA inom provet i enstaka strängar, vilket säkerställer att strängarna är utfällda och att det inte finns någon bindning mellan strängarna. RNA-molekylerna separeras sedanenligt deras storlekar med hjälp av en metod som kallas gelelektrofores. Följandeseparation överförs RNA från gelen till ett blottmembran.(Även om detta steg är det som ger tekniken namnet ”northern blotting”, används termen vanligtvis för att beskriva hela proceduren.) När överföringen är klar bär blottningsmembranet alla RNA-band som ursprungligen är på gel. Därefter behandlas membranet med en liten bit DNA eller RNA som kallasen sond, som har utformats för att ha en sekvens som är komplementär till apartikulär RNA-sekvens i provet; detta gör det möjligt för sonden att hybridisera, ellerbinda, till ett specifikt RNA-fragment på membranet. Dessutom har sonden alabel, som vanligtvis är en radioaktiv atom eller ett fluorescerande färgämne. Således, efter hybridisering, tillåter sonden RNA-molekylen av intresse för att upptäckas bland de många olika RNA-molekylerna på membranet.