TUNEL farvning og TUNEL assay

Gao y et al. brugt HRP-DAB TUNEL assay kit ab206386 til at analysere vævssektioner fra musens æggestokke. A. sektion behandlet med DNase I som positiv kontrol. B. negativ kontrol uden TdT. C og f. repræsentative eksperimentelle billeder. Kerner farvet med TUNEL-analysen er brune. Sektioner blev modfarvet med Methylgrøn.

fordele og ulemper ved TUNEL-farvningsmetoder

Tunel-farvnings – / TUNEL-analyseprotokoller, der bruger et nukleotid, der er direkte mærket med et fluorescerende farvestof, er hurtigere end indirekte metoder, der bruger enten et antistof eller et streptavidin-biotin-kompleks, da de kræver mindre farvningstrin.

metoder, der er afhængige af biotin-mærkede nukleotider, kan drage fordel af amplifikationen af streptavidin-biotinkomplekset. De kræver yderligere blokeringstrin for at neutralisere endogent biotin og reducere baggrundsfarvning, selvom disse er fælles for alle forskere, der kører traditionel kromogen immunhistokemi.

brdu-baserede metoder kan også producere et lysere signal, da BrdU typisk lettere inkorporeres af TdT-metoden.

den relative popularitet af TUNEL-farvning / TUNEL-analysemetoder

en undersøgelse af 50 forskningsartikler, der blev offentliggjort i 2017, indeholdende udtrykket “TUNEL-analyse” eller “TUNEL-farvning”, afslørede det:

– 50% af papirerne brugte dUTP direkte konjugeret til FITC

– 15% brugte biotin-dUTP og streptavidin-HRP

– 15% brugte FITC-dUTP og et anti-FITC – antistof konjugeret til HRP

-12% brugte digoksigenin-dUTP og et anti – digoksigeninantistof konjugeret til enten et fluorescerende farvestof eller HRP

-8% brugte br-dutp og et anti-brdu-antistof konjugeret til et fluorescerende farvestof

alle de undersøgte papirer brugte Tunel-analysen til billeddannelse snarere end strømningscytometri. Hvor HRP blev brugt, blev DAB-substrat tilsat for at skabe en brun plet. Mere end 90% af forskningspapirerne brugte et sæt til TUNELFARVNING.