LNCaP

Wu et al. (1994) ont reproduit les tumeurs LNCaP d’origine humaine chez des souris immunodéprimées par co-injection de cellules LNCaP avec des fibroblastes osseux humains SEP. Des cellules ont été injectées par voie sous-cutanée à plusieurs sites dans le flanc de la souris et après environ 4 semaines de croissance, les tumeurs étaient facilement détectables par examen physique et présentaient un taux de croissance élevé (17-33 mm3 / jour).

Pour reproduire le déplacement caractéristique des cellules PCa vers l’IA, des souris hôtes LNCaP ont été castrées par incision midscrotale environ 8 semaines après l’injection. Les tumeurs ont été maintenues chez des hôtes castrés pendant 4 à 5 semaines, période à laquelle les tumeurs restantes ont été récoltées. Au total, deux sous-ensembles de cellules ont été collectés à partir d’hôtes castrés: C4 et C5, collectés respectivement à 4 et 5 semaines.

Pour sélectionner davantage les cellules AI-PCa, la sous-ligne C4 a été co-injectée avec des fibroblastes humains atteints de SEP dans un hôte castré. Les tumeurs résultantes ont été isolées et une sous-ligne supplémentaire a été générée, C4-2.Les comparaisons de caryotypes

indiquent que les cellules Lncap cultivées chez des hôtes intacts (sous-ligne M) ont un nombre de distribution chromosomique modal de 83, les sous-lignes C4 et C5 avec 85 et la sous-ligne C4-2 avec 83.

Pour vérifier davantage que ces cellules étaient d’origine humaine, l’analyse du caryotype a permis de déterminer que les cellules parentales LNCaP avaient 7 chromosomes marqueurs distincts, avec deux copies de chacun. Les sous-lignées M, C4, C5 et C4-2 contenaient la plupart des chromosomes marqueurs, la sous-lignée M étant la plus similaire aux cellules LNCaP parentales. C4, C5 et C4-2 ne sont que très peu distincts de LNCaP et de la sous-ligne M avec l’ajout d’un chromosome marqueur résultant d’un ajout de segment au chromosome 6. Un chromosome Y n’est pas présent dans la plupart des cellules C4, C5 et C4-2, ce qui suggère des altérations chromosomiques majeures.

Les sous-lignées C4, C5 et C4-2 se développent bien dans des conditions de culture tissulaire identiques à celles du LNCaP avec des taux de croissance similaires. Les sous-lignées parentales LNCaP, M, C4 et C5 ont des niveaux d’expression génique de base similaires de l’ornithine décarboxylase (ODC) et de l’antigène spécifique de la prostate (PSA), mais les sous-lignées M, C4 et C5 expriment 5 à 10 fois plus d’ARNm PSA. M, C4, C5 et C4-2 ont également exprimé un ARNm réduit du récepteur des androgènes humains, comme prévu dans les cellules IA.

Insensibilité aux androgènes Toutes les sous-lignes ont été traitées avec de la dihydrotestostérone (DHT), un ligand de haute affinité pour la RA. Le traitement par DHT a provoqué une croissance nettement réduite des cellules C4 et C5 et aucune croissance des cellules C4-2 par rapport au taux de croissance élevé observé dans les cellules LNCaP, suggérant une sensibilité réduite aux androgènes dans les cellules C4 et C5 et AI dans les cellules C4-2. L’analyse de la RA à cellules entières a également indiqué que les cellules LNCaP ont une forme d’affinité beaucoup plus élevée de la RA (Kd = 159 pM) par rapport à C4-2 (Kd = 267 pM).

Les sous-lignées TumorigénicityC4 et C5 présentent une tumorigénicité considérablement accrue lorsqu’elles sont injectées chez des souris mâles intactes, contrairement aux cellules LNCaP parentales. C4 et C5 ont également pu former des carcinomes hautement vascularisés chez des souris castrées lorsqu’elles étaient co-injectées avec des fibroblastes humains atteints de SEP. La sous-ligne C4-2 forme plus facilement des tumeurs chez les hôtes intacts que les sous-lignes C4 et C5 et ce sont les seules cellules capables de former des tumeurs chez l’hôte castré sans co-injection de fibroblastes osseux humains SEP. Ces mêmes tumeurs en C4-2 sont colorées pour le PSA et sécrètent des niveaux élevés de PSA dans le milieu de croissance.