LNCaP
Wu et al. (1994) riprodotto i tumori LNCaP derivati dall’uomo in topi immunocompromessi mediante co-iniezione di cellule LNCaP con fibroblasti ossei umani della SM. Le cellule sono state iniettate per via sottocutanea in più siti nel fianco del topo e dopo circa 4 settimane di crescita, i tumori erano facilmente rilevabili dall’esame fisico e avevano un alto tasso di crescita (17-33 mm3/die).
Per replicare lo spostamento distintivo delle cellule PCa all’IA, i topi ospiti LNCaP sono stati castrati mediante incisione midscrotale a circa 8 settimane dopo l’iniezione. I tumori sono stati mantenuti in ospiti castrati per 4-5 settimane in cui sono stati raccolti i tumori rimanenti. In totale, due sottoinsiemi di cellule sono stati raccolti da ospiti castrati: C4 e C5, raccolti rispettivamente a 4 e 5 settimane.
Per selezionare ulteriormente le cellule AI-PCa, la subline C4 è stata co-iniettata con fibroblasti umani MS in un ospite castrato. I tumori risultanti sono stati isolati e una subline aggiuntiva è stata generata, C4-2.
I confronti del cariotipo indicano che le cellule LNCAP coltivate in ospiti intatti (subline M) hanno un numero di distribuzione cromosomica modale di 83, C4 e C5 subline con 85 e la subline C4-2 con 83.
Per verificare ulteriormente che queste cellule fossero di origine umana, l’analisi del cariotipo ha determinato che le cellule LNCaP parentali avevano 7 cromosomi marker distinti, con due copie di ciascuno. Le linee M, C4, C5 e C4-2 contenevano la maggior parte dei cromosomi marker, con la linea M più simile alle cellule LNCaP parentali. C4, C5 e C4-2 sono solo minuziosamente distinti da LNCaP e la subline M con l’aggiunta di un cromosoma marcatore risultante da un’aggiunta di segmento al cromosoma 6. Un cromosoma Y non è presente nella maggior parte delle cellule C4, C5 e C4-2, suggerendo importanti alterazioni cromosomiche.
Le sottolinee C4, C5 e C4-2 crescono bene in condizioni di coltura tissutale identiche a quelle di LNCaP con tassi di crescita simili. Lncap parentale, M, C4 e C5 subline hanno livelli di espressione genica basale simili di ornitina decarbossilasi (ODC) e antigene prostatico specifico (PSA) tuttavia, M, C4 e C5 subline esprimono 5-10X più PSA mRNA. M, C4, C5 e C4-2 anche espresso ridotto mRNA recettore degli androgeni umani come previsto nelle cellule AI.
Androgeni InsensitivityAll subline sono stati trattati con diidrotestosterone (DHT), un ligando ad alta affinità per AR. Il trattamento di DHT ha suscitato la crescita marcatamente ridotta nelle cellule C4 e C5 e nessuna crescita nelle cellule C4-2 rispetto all’alto tasso di crescita osservato nelle cellule LNCaP, suggerendo una ridotta sensibilità agli androgeni in C4 e C5 e AI nelle cellule C4-2. Il test AR a cellule intere ha anche indicato che le cellule LNCaP hanno una forma di affinità molto più elevata di AR (Kd = 159 pM) rispetto a C4-2 (Kd = 267 pM).
Le sottolinee TumorigenicityC4 e C5 presentano una tumorigenicità notevolmente aumentata quando iniettate in topi maschi intatti, a differenza delle cellule LNCaP parentali. C4 e C5 sono stati anche in grado di formare carcinomi altamente vascolarizzati in topi castrati quando co-iniettati con fibroblasti umani della SM. La subline C4-2 forma più facilmente tumori in ospiti intatti rispetto alle subline C4 e C5 e sono le uniche cellule in grado di formare tumori nell’ospite castrato senza co-iniezione di fibroblasti ossei umani della SM. Questi stessi tumori C4-2 macchiati per PSA e secernevano alti livelli di PSA nel mezzo di crescita.