LNCaP

Wu et al. (1994) reproduceerde de mens-afgeleide LNCaP tumors in immunogecompromitteerde muizen door co-injectie van LNCaP cellen met menselijke botfibroblasten van MS. Cellen werden op meerdere plaatsen subcutaan in de flank van de muis geïnjecteerd en na ongeveer 4 weken groei waren tumoren gemakkelijk op te sporen door lichamelijk onderzoek en hadden ze een hoge groeisnelheid (17-33 mm3/dag).

om de verschuiving van PCa-cellen naar AI te repliceren, werden LNCaP-hostmuizen ongeveer 8 weken na injectie gecastreerd door middel van een midscrotal incisie. Tumoren werden gehandhaafd in gecastreerde gastheren voor 4 tot 5 weken op welk moment resterende tumoren werden geoogst. In totaal werden twee deelverzamelingen van cellen verzameld van gecastreerde gastheren: C4 en C5, verzameld op respectievelijk 4 en 5 weken.

om verder te selecteren voor AI-PCa cellen werd de C4-subline gelijktijdig geïnjecteerd met MS humane fibroblasten in een gecastreerde gastheer. De resulterende tumoren werden geïsoleerd en een extra subline werd gegenereerd, C4-2.

karyotypische vergelijkingen geven aan dat lncap-cellen die in intacte gastheren (m-subline) worden gekweekt, een modaal chromosomaal verdelingsgetal hebben van 83, C4 en C5-sublines met 85, en de C4-2-subline met 83.

om verder te controleren of deze cellen van menselijke oorsprong waren, werd door karyotype analyse vastgesteld dat de ouderlijke LNCaP-cellen 7 verschillende markerchromosomen hadden, met twee kopieën van elk. De M -, C4 -, C5-en C4-2-sublines bevatten het grootste deel van de markerchromosomen, waarbij de M-subline het meest lijkt op de ouderlijke LNCaP-cellen. C4, C5 en C4-2 zijn slechts minutieus te onderscheiden van LNCaP en de M-subline met de toevoeging van een markerchromosoom als gevolg van een segmenttoevoeging aan chromosoom 6. Een Y-chromosoom is niet aanwezig in de meeste C4 -, C5-en C4-2-cellen, wat wijst op belangrijke chromosomale veranderingen.

C4 -, C5-en C4-2-sublines groeien goed onder identieke weefselkweekomstandigheden als LNCaP met vergelijkbare groeisnelheden. Parental LNCaP, m, C4 en C5 subline hebben vergelijkbare baseline genexpressie niveaus van ornithine decarboxylase (ODC) en prostaat specifiek antigeen (PSA) echter, m, C4 en C5 sublines drukken 5-10X meer PSA mRNA. M, C4, C5 en C4-2 brachten ook verminderde humane androgeenreceptor mRNA tot expressie zoals verwacht in AI-cellen.

Androgeenongevoeligheid alle sublines werden behandeld met dihydrotestosteron (DHT), een ligand met hoge affiniteit voor AR. DHT de behandeling veroorzaakte duidelijk verminderde groei in C4 en C5 cellen en geen groei in C4-2 cellen wanneer vergeleken bij het hoge tarief van de groei in LNCaP cellen wordt gezien, die verminderde androgen gevoeligheid in C4 en C5 en AI in C4-2 cellen voorstellen. Ar-analyse van de hele cel wees er ook op dat LNCaP-cellen een veel hogere affiniteitsvorm van AR (Kd = 159 pM) hebben in vergelijking met C4-2 (Kd = 267 pM).

Tumorigeniciteit 4 en C5-sublines vertonen een sterk verhoogde tumorigeniciteit bij injectie in intacte mannelijke muizen, in tegenstelling tot ouderlijke LNCaP-cellen. C4 en C5 konden ook hoogst vascularized carcinomen in gecastreerde muizen vormen wanneer co-ingespoten met menselijke fibroblasten van MS. C4-2 subline vormt gemakkelijker tumoren in intacte gastheren dan C4 en C5 sublines en zij zijn de enige cellen bekwaam om tumoren in gecastreerde gastheer zonder co-injectie van menselijke beenfibroblasten van MS te vormen. Deze zelfde C4-2 tumoren gekleurd voor PSA en afgescheiden hoge niveaus van PSA in het groeimedium.