LNCaP

(1994) reproduced the human-derived lncap tumors in immunocompromised mice by co-injection of lncap cells with MS human bone fibroblasts. Komórki wstrzykiwano podskórnie w wielu miejscach w bok myszy i po około 4 tygodniach wzrostu guzy były łatwo wykrywalne przez badanie fizykalne i charakteryzowały się wysokim tempem wzrostu (17-33 mm3/dobę).

w celu replikacji znamiennego przesunięcia komórek PCa do AI, myszy gospodarza LNCaP kastrowano przez nacięcie śródstopia po około 8 tygodniach od wstrzyknięcia. Guzy utrzymywano u wykastrowanych gospodarzy przez 4 do 5 tygodni, po czym zebrano Pozostałe guzy. W sumie z wykastrowanych gospodarzy pobrano dwie podgrupy komórek: C4 I C5, pobrane odpowiednio po 4 i 5 tygodniach.

w celu dalszej selekcji dla komórek AI-PCa, podlinkę C4 wstrzyknięto razem z ludzkimi fibroblastami MS do wykastrowanego gospodarza. Powstałe nowotwory wyizolowano i wygenerowano dodatkową podlinkę, C4-2.

porównania Kariotypów wskazują, że komórki lncap wyhodowane w nienaruszonych gospodarzach (m subline) mają modalną liczbę chromosomów 83, podlinki C4 I C5 z 85, A podlinki C4-2 z 83.

w celu dalszej weryfikacji, czy komórki te były pochodzenia ludzkiego, analiza kariotypu wykazała, że rodzicielskie komórki lncap miały 7 odrębnych chromosomów markerowych, z których każda miała po dwie kopie. Podlina M, C4, C5 I C4-2 zawierały większość chromosomów markera, przy czym podlina m była najbardziej podobna do rodzicielskich komórek LNCaP. C4, C5 I C4-2 różnią się tylko drobno od LNCaP I m subline z dodatkiem chromosomu markera wynikającego z dodania segmentu do chromosomu 6. Chromosom Y nie występuje w większości komórek C4, C5 I C4-2, co sugeruje poważne zmiany chromosomalne.

podlinie C4, C5 I C4-2 rosną dobrze w identycznych warunkach hodowli tkankowej jak LNCaP z podobnymi szybkościami wzrostu. Rodzicielskie lncap, m, C4 I C5 mają podobne wyjściowe poziomy ekspresji genów dekarboksylazy ornitynowej (ODC) i antygenu specyficznego dla prostaty (PSA), jednak podliny m, C4 i C5 wyrażają 5-10X więcej mRNA PSA. M, C4, C5 I C4-2 również wyrażały zredukowany ludzki receptor androgenowy mRNA zgodnie z oczekiwaniami w komórkach AI.

niewrażliwość na androgeny wszystkie podliny były leczone dihydrotestosteronem (DHT), ligandem o wysokim powinowactwie do AR. Leczenie DHT spowodowało znaczne zmniejszenie wzrostu w komórkach C4 I C5 i brak wzrostu w komórkach C4-2 w porównaniu z wysokim tempem wzrostu obserwowanym w komórkach LNCaP, co sugeruje zmniejszoną wrażliwość na androgeny w komórkach C4 I C5 oraz AI w komórkach C4-2. Badanie AR z całych komórek wykazało również, że komórki LNCaP mają znacznie wyższą formę powinowactwa AR (KD = 159 pM) w porównaniu z C4-2 (Kd = 267 pM).

Podliny Tumorigenicyc4 i C5 wykazują znacznie zwiększoną tumorigenicity po wstrzyknięciu w nienaruszone męskie myszy, w przeciwieństwie do rodzicielskich komórek LNCaP. C4 I C5 były również zdolne do tworzenia wysoce unaczynionych nowotworów u wykastrowanych myszy po jednoczesnym wstrzyknięciu z ludzkimi fibroblastami MS. Podlina C4-2 łatwiej tworzy guzy w nienaruszonych gospodarzach niż podliny C4 I C5 i są jedynymi komórkami zdolnymi do tworzenia guzów w wykastrowanym gospodarzu bez jednoczesnego wstrzykiwania ludzkich fibroblastów kości SM. Te same guzy C4 – 2 barwiły się na PSA i wydzielały wysoki poziom PSA do podłoża wzrostu.