LNCaP

Wu et al. (1994) reproduced the human-derived LNCaP tumors in immunocompromised mice by co-injection of LNCaP cells with MS human bone fibroblasts. As células foram injectadas por via subcutânea em múltiplos locais no flanco do rato e após aproximadamente 4 semanas de crescimento, os tumores foram facilmente detectáveis por exame físico e tiveram uma elevada taxa de crescimento (17-33 mm3/dia).

para replicar a mudança marcante das células PCa para a IA, os ratinhos hospedeiros do LNCaP foram castrados através de incisão midscrotal aproximadamente 8 semanas após a injecção. Os tumores foram mantidos em hospedeiros castrados durante 4 a 5 semanas, durante as quais os tumores restantes foram colhidos. No total, dois subconjuntos de células foram coletados de hospedeiros castrados: C4 e C5, coletados em 4 e 5 semanas, respectivamente.

para seleccionar mais células AI-PCa, a sub-linha C4 foi co-injectada com fibroblastos humanos em MS num hospedeiro castrado. Os tumores resultantes foram isolados e uma sub-linha adicional foi gerada, C4-2.As comparações de cariótipo indicam que as células LNCaP cultivadas em hospedeiros intactos (sublina M) têm um número modal de distribuição cromossómica de 83, C4 e C5 com 85, e a Sublina C4-2 Com 83.

para verificar ainda mais que estas células eram de origem humana, a análise do cariótipo determinou que as células LNCaP parentais tinham 7 cromossomas marcadores distintos, com duas cópias de cada. As sublinhas M, C4, C5 E C4-2 continham a maioria dos cromossomas marcadores, com a sublina M sendo mais similar às células da PCNA parental. C4, C5 E C4-2 são apenas minutamente distintos do LNCaP e da sub-linha M com a adição de um cromossomo marcador resultante de uma adição de segmento ao cromossomo 6. Um cromossomo Y não está presente na maioria das células C4, C5 E C4-2, sugerindo grandes alterações cromossômicas.As sublinhas

C4, C5 E C4-2 crescem bem em condições idênticas de cultura de tecidos à LNCaP com taxas de crescimento semelhantes. Os LNCaP Parental, M, C4 e C5 apresentam níveis de expressão genética de base semelhantes de ornitina descarboxilase (ODC) e antigénio específico da próstata (PSA). M, C4, C5 E C4-2 também expressaram mRNA reduzido do receptor androgénico humano, como esperado nas células da IA.

Insensibilidade androgénica todas as sublinhas foram tratadas com dihidrotestosterona (DHT), um ligante de elevada afinidade para a AR. O tratamento com DHT provocou uma redução acentuada do crescimento nas células C4 e C5 e nenhum crescimento nas células C4-2 quando comparado com a elevada taxa de crescimento observada nas células LNCaP, sugerindo uma redução da sensibilidade androgénica nas células C4 e C5 E AI nas células C4-2. O ensaio ar de células inteiras também indicou que as células LNCaP têm uma forma de afinidade muito mais elevada de AR (Kd = 159 pM) quando comparadas com C4-2 (Kd = 267 pM).

TumorigenicityC4 e as sub-linhas C5 apresentam um aumento significativo da tumorigenicidade quando injectadas em ratos machos intactos, ao contrário das células progenitoras do LNCaP. C4 e C5 também foram capazes de formar carcinomas altamente vascularizados em ratos castrados quando Co-injetados com fibroblastos humanos em MS. A sublina C4-2 forma mais facilmente tumores em hospedeiros intactos do que as sublinhas C4 e C5 e são as únicas células capazes de formar tumores em hospedeiro castrado sem Co-injecção de fibroblastos ósseos em MS humana. Estes mesmos tumores C4-2 manchados para PSA e segregados altos níveis de PSA no meio de crescimento.