LNCaP

Wu et al. (1994) reproducerade de humana härledda lncap-tumörerna i immunkomprometterade möss genom saminjektion av LNCaP-celler med MS humana benfibroblaster. Celler injicerades subkutant på flera ställen i musflanken och efter cirka 4 veckors tillväxt var tumörer lätt detekterbara genom fysisk undersökning och hade en hög tillväxttakt (17-33 mm3/dag).

för att replikera kännetecknet för PCA-celler till AI kastrerades lncap-värdmöss genom midscrotal snitt vid ungefär 8 veckor efter injektion. Tumörer bibehölls i kastrerade värdar i 4 till 5 veckor vid vilken tid återstående tumörer skördades. Totalt samlades två delmängder av celler från kastrerade värdar: C4 och C5, samlade vid 4 respektive 5 veckor.

för att ytterligare välja för AI-PCa-celler injicerades C4-sublinjen med MS-humana fibroblaster i en kastrerad värd. De resulterande tumörerna isolerades och en ytterligare sublin genererades, C4-2.

karyotypjämförelser indikerar attlncap-celler som odlas i intakta värdar (m-sublin) har ett modalt kromosomfördelningsnummer på 83, C4 och C5-sublinjer med 85 och C4-2-sublinjen med 83.

för att ytterligare verifiera att dessa celler var av humant ursprung bestämde karyotypanalys att föräldrarnas LNCaP-celler hade 7 distinkta markörkromosomer, med två kopior av vardera. M -, C4 -, C5-och C4-2-underlinjerna innehöll de flesta markörkromosomerna, med M-underlinjen som mest liknar föräldrarnas lncap-celler. C4, C5 och C4-2 skiljer sig endast minutiöst från LNCaP och m-sublinjen med tillsats av en markörkromosom som härrör från ett segmenttillägg till kromosom 6. En Y-kromosom finns inte i de flesta C4 -, C5-och C4-2-celler, vilket tyder på stora kromosomala förändringar.

C4, C5 och C4-2 sublines växer bra under identiska vävnadsodlingsförhållanden som LNCaP med liknande tillväxthastigheter. Föräldrarnas LNCaP -, m -, C4-och C5-sublin har liknande baslinjegenuttrycksnivåer av ornitindekarboxylas (ODC) och prostataspecifikt Antigen (PSA) men m -, C4-och C5-sublinjer uttrycker 5-10x mer PSA-mRNA. M, C4, C5 och C4-2 uttryckte också reducerad human androgenreceptor mRNA som förväntat i AI-celler.

Androgen Okänslighetalla sublinjer behandlades med dihydrotestosteron (DHT), en högaffinitetsligand för AR. DHT-behandling framkallade markant minskad tillväxt i C4-och C5-celler och ingen tillväxt i C4-2-celler jämfört med den höga tillväxttakten som ses i LNCaP-celler, vilket tyder på minskad androgenkänslighet i C4 och C5 och AI i C4-2-celler. Helcell ar-analys indikerade också att LNCaP-celler har en mycket högre affinitetsform av AR (Kd = 159 pM) jämfört med C4-2 (Kd = 267 pM).

TumorigenicityC4 och C5 sublines uppvisar kraftigt ökad tumorigenicitet när de injiceras i intakta hanmöss, till skillnad från föräldrarnas lncap-celler. C4 och C5 kunde också bilda mycket vaskulariserade karcinom i kastrerade möss när de injicerades med MS humana fibroblaster. C4-2-sublinjen bildar lättare tumörer i intakta värdar än C4-och C5-sublinjer och de är de enda cellerna som kan bilda tumörer i kastrerad värd utan saminjektion av MS-humana benfibroblaster. Samma C4-2-tumörer färgades för PSA och utsöndrade höga nivåer av PSA i tillväxtmediet.