G418 (Geneticin)

Usein kysyttyä

miksi yksi G418-pulloistani jähmettyy -20°C: ssa säilytettynä, kun taas toinen pysyy täysin nestemäisenä ja läpikuultavana?
havaitsemme saman ilmiön sisäisesti. Liuoksen jäätymisreaktio ei ala itsestään edes alle 0°C: n, sillä se tarvitsee käynnistyäkseen häiriön. Häiriö voi olla tärinä, shokki jne. Tutkijoidemme mukaan havaitsemme usein eroja G418: n useiden putkien jähmettymisessä, mikä voidaan selittää yhden putken eikä muiden pienen iskun vuoksi.
huomaa, että heti kun nesteessä on tapahtunut kiinteytymistä, se käyttäytyy ketjureaktion tavoin ja leviää nopeasti koko käytettävissä olevaan liuostilavuuteen.

mikä on suositeltava säilytysmenetelmä G418: lle?
G418 toimitetaan huoneenlämmössä. Kun se on saatu, se on säilytettävä 4°C: ssa lyhytaikaista varastointia varten tai -20°C: ssa pitkäaikaista varastointia varten. Vältä toistuvia jäätymis-sulamisjaksoja. Viimeinen käyttöpäivä on merkitty tuotteen etikettiin. Kun se on avattu, se pysyy stabiilina 1 vuoden ajan -20°C: ssa, jotta vältät toistuvat jäätymis-sulamisjaksot, ja sitä voidaan pitää 4°C: ssa 3 kuukautta, jos sitä säilytetään steriileissä olosuhteissa.

mikä on G418: n valintapitoisuus nisäkässoluissa?
G418: n käyttöpitoisuus neo-geenillä transfektoitujen nisäkässolulinjojen valinnassa ja ylläpidossa vaihtelee monista tekijöistä, muun muassa solutyypistä riippuen. Siksi suosittelemme määrittämään isäntäsolulinjan tappamiseen tarvittavan antibiootin optimaalisen pitoisuuden käsittelemällä soluja aluksi useilla pitoisuuksilla (esim.100 µg/ml – 1 mg/ml). Huomaa: G418: aa käytetään säännöllisesti 400 µg/ml.

plasmidissani on Neo-geeni. Voinko käyttää G418 valita sen E. coli?
Ei. G418: aa voidaan käyttää vain Neo-geeniä ilmentävissä nisäkässoluissa. Sopiva antibiootti Neo-geeniä ilmentäville E. coli-transformanteille on kanamysiini.